Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现人形体内自身免疫反应到经常出现1改进型乳癌诊疗病因的困难重重率在幼儿中期就有很好的描绘，多个人形体内自身免疫反应阴性的幼儿中都有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的幼儿这一人口比例增大到84%。即便如此，占诊疗1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的发病的系统还没有得到充分的研究者。

愈发多的人开始常用分期系统来定义1改进型乳癌的困难重重：个形体在经常出现多种人形体内自身免疫反应时进到第1下一阶段，经常出现体温精神状态时进到第2下一阶段，经常出现病因时进到第3下一阶段。一些多发人形体内自身免疫反应阴性的个形体，在1期和2期，困难重重较极快，并发展为发病的1改进型乳癌。我们之前描绘了一分组在首次检验到多种人形体内自身免疫反应抽取后至较少10年无乳癌的近于极快困难重重者，这分组病症总人数较少，但构造非常明确。随后，我们推测人形体内自身肝细胞特异性CD8+T细胞核分裂反应会在困难重重很极快的病症中都基本不存在，但在近期发病和普遍存在的乳癌病症中都很容易检验到。这不太可能表明，与困难重重病症远比，这些病症自身免疫反应会的调节提高。

早期研究者表明，尽管调节性T细胞核分裂(Treg)总数情况下，但乳癌病症存在一些功能不足之处，其中都有数对IL-2的反应会能力降低。此外，乳癌病症中都的畸变CD4+T细胞核分裂不太可能对调节更具抵抗性，表现为畸变T细胞核分裂的诱发增强，自然地造成了的Treg和粘液造成了的正向Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞核分裂中都IL-2反应会增强。本研究者的用以是描绘了CD4+调节性T细胞核分裂(Treg)在领头近于很极快困难重重者中都的构造，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究者是一项以人群结合的交叉研究者，在21岁不限确诊的病症亲属中都核查1改进型乳癌的凶险因素。我们之前描绘了一直很极快困难重重者的构造，他们保持良好多重人形体内自身免疫反应阴性有约10年，但没有经常出现乳癌的诊疗病因，极快性或非变性自身免疫。随后，10名继续保持良好无乳癌并希望提供大量形体液抽取的很极快困难重重者纳入T和B细胞核分裂功能分析。在在此之前的研究者中都，8名极快困难重重者(SP分组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的人形体内自身免疫反应阴性。所有的参加者都属于1改进型乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失去了人形体内自身免疫反应对某些肝细胞的施打会，然而，一名病症已经属于2期至较少6年，但没有经常出现诊疗病因，一名病症被诊断为乳癌，该受试者72岁，在搜集实验抽取时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中都对该供形体来进行了基本上评量。分离外周血单个核分裂细胞核分裂(PBMCs)，采用多表达式流式细胞核分裂心法和T细胞核分裂诱发检验评量供形体中都Treg的频磬、环境因素和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)来进行无行政官员聚类分析，评量Treg环境因素。

结果：与健康供形体远比，来自极快困难重重形体的心灵CD4+T细胞核分裂的行政官员聚类揭示，激活的心灵CD4+ Treg频磬增大，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白质(GITR)问到增大有关。一名HbA1c升温的病症与困难重重很极快者和比如说的对照分组远比，Treg磬相同。功能分析表明，与健康供形体远比，来自很极快困难重重形体的Treg特异性的CD4+畸变T细胞核分裂诱发明显受损。表现为对畸变CD4+T细胞核分裂CD25和CD134问到的诱发增大。

上图1 深入的环境因素分析揭示，CD4+Treg亚改进型在极快困难重重数据流中都增大。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -细胞核分裂上。根据标明物问到鉴定出10个元簇:心灵T细胞核分裂_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核分裂;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个完全相同Treg标明分解的10个元簇的MST。每个路由代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在路由分组周围上色。每个路由中都的饼上图问到单个标明的问到行政级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示整形体标明问到。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)比起总质量为每个metacluster罐1](总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核分裂(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核分裂(l)。橘色带次子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 常用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频磬的增大是困难重重很极快的标志。分级相关联(a - f)和柑橘分析(g-k)比起SP参加者和比如说的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞核分裂上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR问到来进行分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(白点)和SP(斑点)分组以及供形体SP 606(橘色)中都CD25+ cd127的频磬综合上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联次子集的罐1];(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)油菜簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3问到强度纹理，箭头值得注意的簇被标识为SP和HD数据流两者之间的完全相同。(j)罐1]揭示了在SP(斑点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起总质量(人口比例)。(k)直方上图揭示每个簇的环境因素(粉红色)和Treg标明比起问到与背景问到(红色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中都标明的问到有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验

上图3 与健康献血者远比，困难重重很极快者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T细胞核分裂元簇(心灵T细胞核分裂_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核分裂;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个问到标明的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的问到热上图(sp606不有数在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR问到串联，揭示直方上图(c)和综合上图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供形体有数，p< 0.05(红色)供形体SP 606和比如说的HD不有数在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR问到，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)串联，揭示直方上图(e)和综合上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检验

上图4 来自很极快困难重重的CD4+ treg细胞核分裂控制畸变CD4+T细胞核分裂的能力降低。SP分组用红色的该线和带次子问到，HD分组用粉红色的该线和带次子问到，橘色的该线/带次子问到供形体sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按观察的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠重置细胞核分裂，培养3几天后来进行流式细胞核分裂心法检验。(a-d)与CD4+；也者比起应的treg培养(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。常用阴性对照(激活的响应细胞核分裂包含treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

上图5 畸变CD4+T细胞核分裂对很极快困难重重的T细胞核分裂重置的诱发更引人注意。SP分组用红色的该线和带次子问到，HD分组用粉红色的该线和带次子问到，橘色的该线/带次子问到供形体sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按观察的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠重置细胞核分裂，培养3几天后来进行流式细胞核分裂心法(CD25反染)和细胞核分裂因次子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培养。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大中都的问到。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

论据：我们得出的论据是，来自很极快困难重重次子的重置心灵CD4+Treg在GITR问到中都得到了扩展和丰富，忽视了进一步研究者Treg在1改进型乳癌风险个形体中都的异质性的有效性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28